BITO prov v.13, NA22 år2 CRISPR-Cas9, PCR, TRANSF.

Vilka två metoder finns för att masskopiera DNA? kloning, PCR

Hur går kloning av gener till? den intressanta genen klipps ut och förs in i en vektor, när vektorn replikeras gör även genen det

Vad är en vektor? bakterieplasmid eller virus

Vad skiljer PCR från kloning? möjligt att analysera mycket små mängder av DNA från ett fåtal celler

Vad står PCR för? polymerase chain reaction

Inom vilka olika områden (ex.) är PCR användbart? molekylärbiologisk och genetisk forskning, medicin, brottsutredningar

Vad kan man exempelvis andvända PCR till inom medicin? identifiera viss bakterie eller virus, ta reda på om ett embryo bär visst anlag

Hur mycket DNA krävs för att man ska kunna genomföra en PCR? ett fåtal celler med DNA

PCR liknar den naturliga replikationsmetoden. Skillnader? istället för att enzymer delar DNA-strängarna används värme för att bryta bindningarna, annat DNA-polymeras, specifika primrar för ändamålet

Varför används primrar vid PCR? DNA-polymeras behöver något att fästa den första nukleotiden vid

Hur stora är primrarna som används vid PCR? Varför? minst 20 kvävebaser, kan fästa på annan sekvens på fel ställe annars

Hur många primrar behöver man vid PCR? flera av två olika, en typ som är komplementär till ena DNA-strängen och en typ komplementär till den andra

När man ska göra PCR blandas en reaktionsblandning. Vad ingår i den? DNA, primrar, buffertlösning, DNA-polymeras, nukleotider, magnesiumjoner

Varför används magnesiumjoner vid PCR? krävs för att aktivera DNA-polymeras

Vilken typ av DNA-polymeras används vid PCR? Varför? Varifrån har man tagit den? Taq-polymeras, värmetåligt, bakterien Thermus aquaticus

Vad fick man göra vid PCR, innan man började använda Taq-polymeras? Varför? tillsätta nytt DNA-polymeras för varje ny cykel, förstördes av värmen

Hur fungerar/görs PCR? reaktionsblandning placeras i PCR-maskin, 95 grader -> DNA-strängar separeras, 53-60 grader -> primrarna binder till varsin DNA-sträng, 72 grader -> Taq-polymeras bygger komplementär DNA-kedja, repetera

Det finns en formel som anger hur många DNA-kopior som finns efter n cykler. Ange den. 2^n

Hur många kopior av DNA-sekvensen finns efter 30 PCR-cykler? över en miljard

Om man gör PCR av den enklare typen, i liten skala, hur förbereder man? reaktionsblandningen tillsätts i portioner om 10-50 mikroliter till små plaströr som placeras i PCR-maskinen

Vad står GFP för? green fluorescent protein

Vilket protein är ett av de mest använda inom cellbiologisk forskning? Varför? GFP, studera/se processer som sker inuti celler

Hur kan GFP vara fluorescerande? absorberar blått ljus och UV-ljus, emitterar grönt ljus

Vad krävs för att CRISPR-Cas9 ska klippa på rätt plats? Vad händer om den inte vet? enkelsträngat guide-RNA (sgRNA), den klipper inte

Vilka fördelar finns med PCR? enkelt, specifikt, relativt billigt, kräver bara lite DNA

Varför blir resultatet av den första PCR-cykeln en längre DNA-sträng än målsekvensen? finns inget stopp

Efter hur många PCR-cykler har de flesta DNA-fragmenten som kopieras önskad längd? 30

Vad är templat? DNA som ska kopieras

Vad är buffert? rätt pH och jonstyrka

Vad är GFP-protein? protein från maneten A.victoria som fluorescerar vid belysning med UV-ljus

Vad är en rapportörgen? en gen som sätts in för att följa en process, lätt att detektera

Det finns tre sätt att introducera främmande DNA i en bakterie. Vilka? transformation, konjugation, transduktion

Varifrån kommer det främmande DNA:et vid transformation? omgivningen

Varifrån kommer det främmande DNA:et vid konjugation? bakterie

Varifrån kommer det främmande DNA:et vid transduktion? bakteriofag

Hur kan man artificiellt framkalla transformation? kyla och värmechock, elektrporering (elstötar)

Vad innehåller de designade plasmiderna inom gentekniken? origin, promotor, plats där gen kan klippas in, inklippt gen, antibiotikaresistens, bindningsplats för primer (för PCR), ev. rapportörgen

Varför centrifugerar man prover med arvsmassa? fragment sorteras efter storlek, störst längst ut/ner

Vad är lysozym? ett enzym som förstör bakteriers cellväggar genom att klyva polysackarider

Var kan vi naturligt hilla lysozym? i tårvätska och bröstmjölk

Hur lyserar/renar man prover? centrifugering, enzymet lysozym, frysning förstör cellmembran och fullbordar sönderdelning av cellvägg

Vad är kromatografi? separationsmetoder inom analytisk kemi

Vad är HIC-kromatografi? Vad används det till? kromatografi genom hydrofobisk interaktion, separera proteiner i en blandning

Hur funkar HIC-kromatografi? proteiner har aminosyror med olika egenskaper och vissa är hydrofobiska, ju mer hydrofobiska desto mer interaktion med kolonnmaterialet, ändra salthalt i bufferten för att tvinga proteinerna att ändra form och därmed ändra förmågan att interagera med kolonnmaterialet

HIC-komatografi har tre stadier. Vilka? bindning, tvätt, eluering

Vad händer under HIC-kromatografins bindnings-fas? proteiner ändrar form så att hydrofobiska delar exponeras mot kolonnen

Vad händer under HIC-kromatografins tvätt-fas? proteiner som binder svagt till kolonnen tappar taget när de delvis ändras tillbaka till sin ursprungsform

Vad händer under HIC-kromatografins eluerings-fas? de mer hydrofila sidorna på proteinet vänds utåt och även de proteiner som bundit hårdare släpper taget om kolonnen

Hur hög är salthalten under HIC-kromatografins bindnings-fas? 4 mol/dm^3

Hur hög är salthalten under HIC-kromatografins tvätt-fas? 1,3 mol/dm^3

Hur hög är salthalten under HIC-kromatografins eluerings-fas? 10 mmol/dm^3

Vilket salt används vid HIC-kromatografi? (NH4)2 SO4

Klicka

Skriv

Lyssna

Spel

Skriv ut